Kabak sarı mozaik virüsüne karşı monoklonal antikorların geliştirilmesi ve saptanması

Aphid-borneZucchini sarı mozaik virüsü (ZYMV), kabakgillerin en ekonomik, en önemli virüslerinden biridir. Bu virüsü araştırmak ve kontrol etmek için, etkili bir algılama tekniği geliştirmek gerekir. Saflaştırılmış ZYMV virion ve geleneksel hibridoma teknolojisi kullanılarak, ZYMV Zhejiang izolatına karşı monoklonal antikorları (MAb’ler) salgılayan üç hibridoma cel çizgisi (16A11, 5A7 ve 3B8) elde edildi. Üç hibridoma cel çizgisi tarafından salgılanan asitik lfuidlerin çalışma titreleri, indirekt enzime bağlı immünosorbent assay (ELISA) ile 10-7’ye kadar çıkmıştır. Al MAb’ler IgG1, kappa hafif zincir olarak izotip edildi. Western blot analizi, MAb 3B8’in ZYMV’nin kaplama proteini ile spesifik reaksiyona girebildiğini gösterirken, MAblar 5A7 ve 16A11, ZYMV ile enfekte edilen yaprak dokularından yaklaşık olarak 51 kDa’lık bir protein ile kuvvetli bir şekilde reaksiyona girmiştir. Bu moleküler ağırlığa göre, bu reaktif proteinin HC-Pro proteini olabileceğini düşünüyoruz. Bu üç MAb’yi kullanarak, şimdi, eğer, tespit etme deneyleri, yani antijen-kaplı plaka ELISA (ACP-ELISA), nokta-ELISA, doku leke-ELISA, çift-antikorlu sandviç ELISA (DAS-ELISA) ve immüno-parçalanma geliştirdik. ZYMV’nin hassas, spesifik ve kolay tespiti için RT-PCR (IC-RT-PCR). Duyarlılık testi, ZYMV’nin ACP-ELISA, dot-ELISA, DAS-ELISA ve IC-RT-PCR ile sırasıyla 1: 163840, 1: 2560, 1: 327680 ve 1: 1310720’de (w / v) kolayca saptanabileceğini gösterdi. g mL – 1) ZYMV ile enfekte olmuş bitkilerden seyreltilmiş ham ekstraktlar. Bu çalışmada, nokta-ELISA’nın, ayrı ayrı virülifeöz yaprak bitlerinde ZYMV’yi saptamak için kullanılabileceğini gösterdik. Zhejiang, Jiangsu, Shandong ve Hainan eyaletlerinden toplanan toplam 275 sağlıklı bitki örneği, Çin, tarif edilen analizlerle ZYMV’nin varlığı açısından tarandı. Elde ettiğimiz sonuçlar 275 örnekten 163’ünün (% 59) ZYMV ile enfekte olduğunu gösterdi. Bu ifnding, ZYMV’nin şu anda Çin’deki kabakgiller’de yaygın olarak bulunduğunu göstermektedir. Tarafından yapılan RT-PCR
DNA sıralama ve dizi analizleri ifve testlerinin doğruluğunu onayladı. Bu tespit deneylerinin, Çin’de ZYMV’nin kontrolünü önemli ölçüde artırabileceğini düşünüyoruz.